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HPV感染与尖锐湿疣及癌变相关性分析

　　尖锐湿疣是由人乳头瘤病毒(HPV)感染引起的性传播疾病，发病率呈逐年上升趋势。HPV感染后促使鳞状上皮细胞增生，与生殖器鳞状细胞癌有密切关系。本研究对临床拟诊尖锐湿疣的654例患者，应用细胞学、组织学、免疫组织化学、电镜、分子生物学技术进行检测和观察，分析HPV感染尖锐湿疣及癌变有关依据。

1　材料与方法
　　自1990年10月～1994年12月，收集临床拟诊尖锐湿疣654例，其中女性588例，男性66例，年龄16～60岁(20岁以下44例均有不洁性生活史)，高发年龄为21～30岁(58.9%)，发病部位：外阴515例(小阴唇106例、处女膜76例、尿道口73例)，阴道109例，宫颈8例，肛周8例，龟头34例，包皮31例，眼睑1例，口唇1例。双部位发病57例。随机收集26例宫颈癌组织检测HPV。

　　细胞学观察：宫颈刮片取材，95%乙醇固定15 min后行巴氏(或HE)染色，观察涂片中有形成分及细胞形态。将活检组织常规石蜡包埋制片、HE染色，进行组织形态学观察，根据组织学结构特征正确诊断。应用美国Dako公司抗HPV试剂盒，以3% H2O2消除内源性H2O2酶，依次加入兔抗HPV血清、猪抗兔血清、PAP等，检测尖锐湿疣组织中HPV核壳抗原。选用HPV阳性标本碎粒，戊二醛固定后超薄切片，透射电镜观察并查找HPV包涵体。应用核酸分子杂交技术，检测HPV 6B、HPV11。选用免疫组织化学染色阳性反应标本制片，厚5 μm，经蛋白酶K消化(37℃)15 min， 98℃水箱中变性10 min，温箱(38℃)中杂交过夜，地高辛混合体滴加后2 h，以硝基盐四唑和5溴-4氚-3吲哚磷酸盐显色。

2　结果
　　654例经细胞学观察，可见到多少不等挖空细胞者130例(19.8%)，发现有霉菌144例(22%），有滴虫102例(17%)，102例同时感染霉菌和滴虫(15.5%)，淋病4例(0.6%)，上皮细胞不同程度增生性形态改变124例(19%)。经组织学观察诊断为尖锐湿疣442例、假性湿疣54例、乳头状瘤12例、小息肉4例、炎症88例、上皮不同程度增生52例、鳞癌变2例。免疫组织化学染色后，有215例细胞核呈深棕色，阳性反应率48.6%(215/442)。假性湿疣为阴性反应。电镜观察12例尖锐湿疣，组织内挖空细胞胞核增大、核膜不整、核周胞浆细胞器稀少、线粒体空泡化、糖原颗粒消失，出现空泡和透明区，未见到HPV包涵体。用核酸分子杂交技术检测HPV 6B、HPV11，尖锐湿疣30例中细胞核呈蓝色者25例，阳性反应率83.3%(25/30)，26例不同分化宫颈鳞状细胞癌组织，阳性反应率73％（19/26)，假性湿疣为阴性反应。

3　讨论
　　HPV感染引起生殖器鳞状上皮细胞增生、异型增生。本组442例尖锐湿疣组织学观察结果，鳞状上皮增生93例(21%)、上皮不典型增生31例（7%）、鳞癌变2例(0.45%)，电镜下所见挖空细胞核增大、异型、核膜不整、细胞器稀少、线粒体泡化等形态改变，HPV感染后在协同因素作用下，病变向恶性转化，以上表现可能为宫颈癌、外阴癌、阴痉癌不同阶段的病理形态学依据。

　　HPV感染后鳞状上皮一种呈乳头状瘤样增生，形成菜花状尖锐湿疣；一种形成上皮内新生物，可发展为原位癌、浸润癌。应用核酸原位杂交技术检测尖锐湿疣和宫颈鳞癌组织中HPV 6B、HPV11阳性反应率分别为83.3%、73%。证明在尖锐湿疣及宫颈鳞癌组织中有HPV 6B、HPV11存在，可能是HPV感染后引起尖锐湿疣上皮增生、向恶性转化、形成生殖器鳞癌的主要病因。正确诊断尖锐湿疣，及时合理治疗是预防、降低生殖器鳞癌的重要措施。

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